Foi sob a influência de compositores batavos como Josquin des Prez que Giovanni Pierluigi da Palestrina desenvolveu seu estilo de polifonia, que viria a ser considerado como o píncaro da técnica em seu período. Uma das maiores inovações estabelecidas pela música renascentista, a polifonia enfrentou oposição até do Papa João XXII. Apesar de já existir desde a Alta Idade Média, foi durante a Renascença que ela atingiu sua expressão maior, pelas mãos de mestres como Palestrina. Sua técnica abrangeu diversos gêneros de música sacra, entre centenas de motetos, madrigais, missas e ofertórios.